Фрагмент Кленова

Фрагмент Кленова (англ. Klenow fragment) — это большой белковый фрагмент, образующийся при ферментативном расщеплении ДНК-полимеразы I из Escherichia coli протеазой субтилизином (subtilisin). Впервые фрагмент Кленова был описан в 1970 году, и имел 5’ → 3’-полимеразную активность в сочетании с 3’ → 5’-экзонуклеазной активностью (корректорной), но не имел 5' → 3'-экзонуклеазной активности^[1].

Другие меньшие фрагменты, образующиеся при ферментативном расщеплении могли иметь 5'→ 3'-экзонуклеазную активность, но не имели двух активностей, характерных для фрагмента Кленова.

Фрагмент Кленова был использован в качестве ДНК-полимеразы в первых методиках полимеразной цепной реакции^[2] и лишь через некоторое время был заменен термостабильной Taq-полимеразой^[3].

На данный момент используется для маркировки ДНК ("fill-in" 3' укороченных концов с помощью "random hexamers"), для секвенирования ДНК методом Сэнгера и для синтеза второй цепи ДНК.

ПримечанияПравить

↑ Klenow H and Henningsen I. Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 1970. — Vol. 65. — P. 168—175. — doi:10.1073/pnas.65.1.168. — PMID 4905667.
↑ Saiki RK et al. Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia (англ.) // Science : journal. — 1985. — Vol. 230. — P. 1350—1354. — doi:10.1126/science.2999980. — PMID 2999980.
↑ Saiki et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase (англ.) // Science : journal. — 1988. — Vol. 239. — P. 487—491. — doi:10.1126/science.2448875. — PMID 2448875.

[1] Klenow H and Henningsen I. Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 1970. — Vol. 65. — P. 168—175. — doi:10.1073/pnas.65.1.168. — PMID 4905667.

[Saiki1-2] Saiki RK et al. Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia (англ.) // Science : journal. — 1985. — Vol. 230. — P. 1350—1354. — doi:10.1126/science.2999980. — PMID 2999980.

[Saiki3-3] Saiki et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase (англ.) // Science : journal. — 1988. — Vol. 239. — P. 487—491. — doi:10.1126/science.2448875. — PMID 2448875.

[1]

[2]

[3]