Аллофикоцианин

Аллофикоцианин (от Греческого: ἄλλος (аллос) — «другой», φύκος (фикос) — «водоросль», и κυανός (кианос) — «голубой») — светособирающий белок из семейства фикобилипротеинов, в которое так же входят фикоцианин, фикоэритрин и фикоэритроцианин, и является вспомогательным пигментом для хлорофилла. Все фикобилипротеины растворимы в воде и следовательно не могут быть закреплены на мембране как каротиноиды, а вместо этого формируют закреплённые на мембране кластеры, называемые фикобилисомами. Аллофикоцианин поглощает и излучает красный свет (650 и 660 нм соответственно), и легко обнаруживается у цианобактерий и красных водорослях. Способность фикобилинов испускать свет используется в наборах иммунологического анализа. Аллофикоцианин довольно часто используют в проточной цитометрии, при счёте и сортировке клеток, и микроскопии. Для этого в него внедряют химическую сшивку.

Структура аллоцианина из цианобактерии Gloeobacter violaceus.

СтроениеПравить

Аллофикоцианин можно выделить из разных видов красных или сине-зелёных водорослей, каждый из которых синтезирует свою, несколько отличающуюся от других форму этой молекулы. Белок состоит из двух типов субъединиц (α и β), каждая несёт по одной хромофорной группе фикоцианобилина. Общую формулу белка можно описать как (αβ)₃. Молекулярная масса аллофикоцианина 105 кДа.

Спектральные характеристикиПравить

Максимум поглощения	652 нм
Добавочный максимум поглощения	625 нм
Максимум излучения	657.5 нм
Сдвиг Стокса	5.5 нм
Коэффициент экстинкции	2.4 x 10⁵ M⁻¹см⁻¹
Квантовый выход	0.68
Яркость	1.6 x 10⁵ M⁻¹см⁻¹

Сшитый аллофикоцианин

Как упоминалось выше, чтобы использовать аллофикоцианин в иммунологическом анализе, его необходимо химически сшить, чтобы предотратить диссоциацию его субъединиц, что довольно часто происходит в стандартных физиологических буферах.^[1] Традиционным методом для этого служит смешивание с 1-этил-3,3-диметиламинопропилом — мощным сшивочным агентом. Затем его обрабатывают восьми молярным раствором мочевины, а затем дают ренатурировать, но уже в физиологическом буфере. Такая процедура позволяет избавится от несшившихся субъединиц.^[2] Существуют альтернативные способы, использование которых позволяет сохранить нативную структуру тримера и получить более яркий конечный продукт^[3].

ПримечанияПравить

↑ George C. Papageorgiou, Thoula Lagoyanni. Effects of chaotropic electrolytes on the structure and electronic excitation coupling of glutaraldehyde- and diimido ester-cross-linked phycobilisomes. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Bioenergetics Volume 724, Issue 3, 30 September 1983, Pages 323—332
↑ Yeh SW, Ong LJ, Clark JH, Glazer AN. Fluorescence properties of allophycocyanin and a crosslinked allophycocyanin trimer. Cytometry. 1987 Jan; 8(1):91-5.
↑ United States Patent 7256050; High fluorescent intensity cross-linked allophycocyanin. Assigned to Columbia Biosciences Corp.

[1] George C. Papageorgiou, Thoula Lagoyanni. Effects of chaotropic electrolytes on the structure and electronic excitation coupling of glutaraldehyde- and diimido ester-cross-linked phycobilisomes. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — Bioenergetics Volume 724, Issue 3, 30 September 1983, Pages 323—332

[2] Yeh SW, Ong LJ, Clark JH, Glazer AN. Fluorescence properties of allophycocyanin and a crosslinked allophycocyanin trimer. Cytometry. 1987 Jan; 8(1):91-5.

[3] United States Patent 7256050; High fluorescent intensity cross-linked allophycocyanin. Assigned to Columbia Biosciences Corp.

[1]

[2]

[3]